| 在离体条件下，花粉的发育常常离开在体内时的正常轨道(发育为成熟的生殖细胞)，而通过分裂增殖，形成愈伤组织或最终形成胚。Ucz水果信息网 1、花粉发育时期检查Ucz水果信息网 根据培养目的，为提高花粉培养效果，选择合适的花粉发育期很重要。一般四分体以后，花粉细胞发育进入单核时期比较容易分裂增殖。培养前，可在显微镜下进行花粉发育期的检查。Ucz水果信息网 2、接种花粉的消毒Ucz水果信息网 取成熟但还没有开裂的银杏树花粉囊作为外植体，将其浸入75%酒精中消毒20s，再放人1.5%次氯酸钠溶液中消毒30s，用无菌水冲洗3次后用无菌纸吸干即可接种。每年可用于实验研究的新鲜银杏树花粉只有?-10d时间。因此，可将花粉囊进行表面消毒后贮藏于铝质小杯内，再放入4℃的微型于燥罪内，供全年使用。贮藏2年后的花粉仍能保持35%~40%的生活力。Ucz水果信息网 3、培养条件Ucz水果信息网 培养基可选择改进的White培养基、Tulecke(1960)培养基等，植物生长调节剂用IAA或NAA，浓度为0.2—1.0mg/L。培养室的温度要求在24—25℃之间，每天光照12-14h，光照强度为20001x。Ucz水果信息网 4、主要培养基及关键技术Ucz水果信息网 最早的银杏树花粉的组织培养是用添加马铃薯汁的White培养基，于1951年5月进行，随后观察有花粉组织的生长。在花粉的培养中还观察到有精于细胞的形成(Tulecke，1957)。管细胞核通常分裂形成有隔膜的花粉管细胞或者含有20-40个核的多核配子体管细胞:不活动的原叶细胞和分裂相对不频繁的生殖细胞表明这一组织是由管细胞分裂来的。Ucz水果信息网 离体花粉较植物活体内花粉发育表现出更强的多态性，其发育可分为3个明显的阶段:管细胞的扩散生长;顶端生长(可能伴随着分枝);配子体的径向膨胀。蔗糖浓度强烈影响花粉组织的形态发育，高浓度蔗糖抑制配子体的顶端生长及分枝，低浓度蔗糖有助于其表现出与活体内相似的发育模式。Ucz水果信息网 银杏树花粉诱导的组织在液体培养基中生长良好。在7-10L连续培养体系中培养，当其处于最人生长速率时，培养3周时就町获得80gFW/L的组织。Ucz水果信息网 银杏树花粉培养于含有微量元素硼及不含硼的培养基卜，培养物在没有硼的培养基上停止了生长。紫外线抑制花粉组织生长。蓝光叫‘解除这种抑制，在白色荧光灯下组织的生长较在黑暗或白炽灯下减少40%。 |
