| 为了快速繁殖银杏优良无性系苗木，扩大优良品种栽培.分别于l992年冬、1993年冬从郯城县林业局选购银杏5、9、324、13号4个优良无性系苗木，进行栽培.用于随时采取嫩茎进行组培育苗试验。经过3年试验。繁苗、生根、移栽均获得成功，平均成活率86.6%。Tbw水果信息网 一、试验材料与方法Tbw水果信息网 1、试验材料Tbw水果信息网 1.1、苗木嫩茎培养Tbw水果信息网 取银杏优良无性系1～3年生(雌株或雄株)苗嫩茎.去叶.放在紫外线下照射20分钟，在70%酒精中浸泡3～4秒钟后，用0.1%升汞液浸泡7～8分钟，再用无菌水冲洗4～5次，然后切取1～2cm长带有腋芽的茎段.接种在预制好的分化培养基上，每瓶接种4～5块。Tbw水果信息网 1.2、茎尖培养Tbw水果信息网 取休眠芽枝条，用洗衣粉水洗过，流水冲洗后，紫外线照射20分钟，用70%酒精浸泡2分钟，0.1%升汞液浸泡8～10分钟，再用无菌水冲洗4～5次，在超净工作台上剥去鳞片，取出3～5mm的茎尖，随即接种在预制好的分化培养基上，每瓶接种6～8块。Tbw水果信息网 1.3、不同年龄母树嫩茎培养Tbw水果信息网 取30年生以上、15～20年生、1～5年生母树当年生嫩枝，其他处理方法同嫩茎培养。Tbw水果信息网 2、试验方法Tbw水果信息网 2.1、培养基Tbw水果信息网 筛选基本培养基：选用O、WH、WPM、MS、N6、N6(改动)基本培养基，附加BA0.8mg/L、INAA0.4mg/L、蔗糖3%进行筛眩Tbw水果信息网 分化培养基为改动的N6附加BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.10mg/L蔗糖3%，调至pH值5.8，分装，高压灭菌后待用。Tbw水果信息网 生根培养基为改动的N附加BA0.01mg/L+NAA0.05～0.1mg/L+蔗糖3%，调至pH值5.8，分装，高压灭菌后待用。Tbw水果信息网 2.2、光照与温度Tbw水果信息网 接种的材料置于两支40W日光灯下，控制温度24-28℃。Tbw水果信息网 2.3、分化培养Tbw水果信息网 接种的外植体在分化培养基上，培养20-30天腋芽萌发出苗；培养40天左右，少数外植体的切口产生愈伤组织.经继代培养，愈伤组织分化出丛生苗。Tbw水果信息网 2.4、生根培养Tbw水果信息网 将2～3cm高的小苗剪下，扦插在生根培养基上，20～30天即生根，40天左右长成健壮的小苗。Tbw水果信息网 2.5、小苗移栽Tbw水果信息网 小苗生根培养30天左右，根长2～3cm，苗根、茎已半木质化。打开瓶塞，在培养架上炼苗3～5天，取出小苗，洗净培养基，移入用0.5%高锰酸钾液消毒的细沙袋中，用塑料薄膜遮盖，每天喷水2次，lO～15天去掉薄膜，5～6周后移入大田，小苗即正常生长。Tbw水果信息网 二、结果与分析Tbw水果信息网 1、基本培养基的选择Tbw水果信息网 据多种基本培养基试验(表1)，在细胞分裂素、生长索、蔗糖相同的条件下，改动的N基本培养基(CI2一6)较适宜银杏外植体生长，腋芽萌动率达56%。但是外植体在此培养基上生长5周左右，萌发芽逐渐停止生长。这说明CI2～6的细胞分裂素、生长素的浓度和比值不适其外植体生长。Tbw水果信息网 2、BA、NAA不同浓度和配比对分化生长的影响Tbw水果信息网 从表2看出CI2-7和CI2-8对外植体腋芽萌发和诱导产生愈伤组织及分化出丛生苗率较高。CI2-7即N6(改动)+BA0.9mg/L+NAA0.08mg/L，腋芽萌发率72.1%；CI2-8即N6(改动)+BA1.0mg/L+NAA0.10mg/L的外植体腋芽萌发率68.6%，且有两块外植体的切口产生两块Tbw水果信息网 0.8cm的愈伤组织，每块愈伤组织分化出芽20多个，有11个芽抽茎长成小苗。Tbw水果信息网 3、母树年龄对外植体腋芽萌发率的影响Tbw水果信息网 在基本培养基为N6(改动)附加BA0.5mg/L+NAA0.04mg/L+蔗糖3%的培养基上，幼年母树当年生嫩枝外植体与成年母树当年生嫩枝外植体相比，生活力强，腋芽萌发率高。母树l～5年生的萌芽率达46.2%，母树15-20年的萌芽率为14.2%，30年生以上的萌芽率仅8%。且前者生长旺盛，叶色绿，而后者全部枯死。Tbw水果信息网 4、不同BA、NAA浓度和配比对生根的影响Tbw水果信息网 银杏无根苗生根比较困难(表3)，从表3中看出，在只有生长素的培养基上，无论其浓度高低均不生根。当生长素的浓度适宜，并有一定浓度的细胞分裂素时，小苗才能生根。即改动的N6基本培养基+BA0.01mg/L+NAA0.05-0.10mg/L，生根率达53.8%～66.7%，且有随着NAA浓度的升高生根率升高的趋势。Tbw水果信息网 三、讨论Tbw水果信息网 1、经过试验筛选，分化较好的培养基是N6(改动)+BA0.9mg/L+NAA0.08mg/L和N6(改动)+BA1.0mg/L+NAA0.10mg/L。但仍有20%以上的腋茅未萌发、且产生愈伤组织及愈伤组织分化出丛状苗的频率很低，还不能快速繁殖，外植体腋芽萌发及产生愈伤组织和愈伤组织分化出苗，除与材料基因型及采取材料的母树年龄有关外，培养基的细胞分裂素和生长素的配比起重要作用Tbw水果信息网 2、外植体腋芽萌发，产生愈伤组织及愈伤组织分化出芽、无根苗生根长成完整植株，需2个多月的时间。繁苗的周期较长，因此快速繁殖最佳技术程序有待进一步探讨。Tbw水果信息网 3、由于材料在自然界中生长的时间长，真菌多深入到内，一系列消毒难以彻底，在剥离茎尖中刀具即起到真菌的传播作用，故茎尖培养保存辜很低，以致试验无法进展。但是做脱毒培养时，取茎尖是必由之路，因此取茎尖的操作技术需要进一步探索。 |
